茶叶中茶氨酸的高效液相色谱检测方案茶叶中茶

茶叶中茶氨酸的高效液相色谱检测方案 茶氨酸（L-Theanine）是茶叶中特有的游离氨基酸，茶氨酸是谷氨酸γ-乙基酰胺，有甜味。茶氨酸含量因茶的品种、部位而变动。茶氨酸在干茶中占重量的1%-2%。茶氨酸在化学构造上与脑内活性物质谷酰胺、谷氨酸相似，是茶叶中生津润甜的主要成份。茶氨酸含量约为新茶的1～2%左右，其含量随发酵过程减少。 【茶氨酸的作用】 对中枢神经影响：茶氨酸可以明显促进脑中枢多巴胺(dopamine)释放 ，饮茶抗疲劳作用被认为在一定程度上来自这一效果 降压作用：茶氨酸对脑内中枢神经递质5-羟色胺分泌量具有调节作用 影响记忆：茶氨酸可以增强记忆能力，提高学习效率 健康食品：保健食品市场上多数是为成人防病或改善作用的品种。像茶氨酸这种既不具有催眠，又可以解消疲劳、降低血压和提高学习记忆能力的保健食品实为少见，引人注目。为此，茶氨酸曾在1998年德国召开的国际食品原料会上获得研究部门大奖。 鉴于茶氨酸在市场上的应用日趋增长，我公司参照GB23193-2008，利用LC-10Tvp高效液相色谱仪给出了茶氨酸的HPLC检测方案。 1、仪器与试剂 1.1仪器、设备 LC-10Tvp高效液相色谱仪 Vertex 色谱柱：250mm×4.6mm×5μm 分析天平 振摇恒温水浴 离心机 C18固相萃柱 针头过滤器 微孔滤膜：0.45µm 1.2试剂 茶氨酸标准品 邻苯二甲醛（OPA) 乙硫醇 硼酸 氢氧化钠 甲醇（色谱纯） 乙腈（色谱纯） 2、供试品溶液和对照品溶液的制备 对照品溶液的制备 取茶氨酸储备液（1mg/ml)适量，用水稀释成所需浓度。 供试品溶液的制备 1、样品前处理：茶叶样品经磨碎混匀后，准确称取0.5g（精确到0.001g），加水100ml，在80℃振摇恒温水浴中浸提45min，冷却后将浸提液离心，过滤，上清液混匀待用。 2、净化：C18小柱活化：依次用5ml甲醇，5ml水加入到净化小柱中，将上述试液过固相萃取柱，在经过0.46um滤膜过滤到棕色试管中，待衍生用。 3、衍生：准确吸取茶氨酸标准使用液（或样品液）0.5ml于棕色试管中，加入0.5mlOPA衍生试剂，反应2min后，立即取10ml上机分析。 3、色谱条件 色谱柱：C18, 4. 6 mmx250 mm，粒度5 µm 流动相：以20mmol/l乙酸铵溶液为流动相A，以20mmol/l乙酸铵溶液：甲醇：乙腈=1：2：2为流动相B，VA:VB=1：1 波长：338nm 流速：1. 0 mL/min 柱温：40℃ 4、测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。