色谱柱选择的核心原则和关键参数选择指南 物理参数

一、色谱柱选择的核心原则

‌匹配分析目标‌

重现国标方法时选择与标准方法相似的色谱柱（粒径、比表面积、键合类型等）

新化合物分离时优先考虑硅胶基质填料（适用于大部分小分子化合物）

高pH值或碱性化合物需选择高封端或特殊封端色谱柱‌

考虑样品特性‌

化学结构：共轭基团、极性基团等

溶解性：在流动相中的溶解度

稳定性：是否易被氧化、还原或水解

酸碱性：化合物的酸碱性质‌

‌优化分析参数‌分离度要求

柱效要求

分析时间限制

灵敏度需求‌

二、关键参数选择指南

物理参数

参数 选择标准 典型值范围

‌柱长‌ 短柱(15-100mm)运行时间短；长柱(150-250mm)分辨率高 分析柱常用150mm

‌内径‌ 小内径(≤2.1mm)灵敏度高；大内径(3-21.2mm)载样量高 分析柱常用4.6mm

‌粒径‌ 粒径越小分离越快(3.5μm)，但压力越高；5μm为常用平衡点 3.5-10μm

‌孔径‌ 小分子用80-120Å；大分子用300Å 60-300Å

‌颗粒形状‌ 球形颗粒柱效高、重现性好；不规则颗粒在粘度大流动相中表现更好 现代HPLC多用球形颗粒

化学参数

参数 选择标准 注意事项

‌基质‌ 硅胶基质(pH 2-8)；聚合物基质(pH 1-14) 碱性样品需特殊处理

‌键合相‌ C18(通用性强)；C8(中等保留)；苯基(芳香族选择性)；氰基(极性化合物) 长链比短链稳定

‌封端‌ 高封端改善碱性化合物峰形 未封端柱对碱性化合物不友好

‌载碳量‌ 高载碳量增加非极性化合物保留 通常8-20%